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枸杞多糖的检测方法

作者:斯诺特生物技术有限公司浏览次数:时间:2015-07-17 21:03:38

枸杞多糖的检测方法

1、方法原理
粗多糖在硫酸的作用下,水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,与苯酚
缩合成有色化合物,用分光光度法测定样品在粗多糖含量。
2、主要设备和仪器
设备721型分光光度计(上海第三分析仪器厂)
试剂
枸杞多糖标准液:精确称取105℃干燥恒重的标准枸杞多糖0.1000g,置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度,其浓度为1.0mg/mL,用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。
5%苯酚溶液:取苯酚100g,沙浴蒸馏,收集180℃-182℃溜分,称取此馏分5g,用水溶解后,定容至100mL棕色容量瓶中备用(现用现配)。
3、测定步骤
3.1、最大吸收波长的选择
精密吸取0.04mg/mL无水枸杞多糖溶1.0

mL,置10mL具塞试管中,加入蒸馏水使体积为2.0mL,再加苯酚试液1.0mL,摇匀,迅速滴加浓硫酸5.0mL,摇匀后放置5min,置沸水浴中加热15min,取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如加上法配制空白。用721分光光度计在470-510nm测定吸光度,测定最大吸收波长为490±nm。
3.2、标准曲线的绘制
精密吸收浓度为0.1mg/mL的枸杞多糖标准,标准工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL,分别置于10mL具塞试管中,各加蒸馏水使体积为2.0mL,再加苯酚试液1.0mL,摇匀,迅速滴加浓硫酸5.0

mL,摇匀后放置5min,置沸水浴中加热15min,取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如上法配制空白。用721分光光度计,1cm比色皿,在490nm处测定吸光度,绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。结果浓度在0.010-0.04mg/mL范围内与吸光度呈现性关系。
回归方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3,

Y=0.9997(n=6)。
3.3、含量测定
3.31、多糖的提取与精制

取300mL,用氟仿多次萃取,以除去蛋白质,加活性炭1%脱色,抽滤,滤液加入95%乙醇,使含醇量达80%,静置过夜。过滤,残渣用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤,真空干燥,即得粗多糖。
3.32、供试液的配制

精密称取粗多糖粉末0.2000g,置于50mL容量瓶中,定容,摇匀,即得供试品溶液。
3.33、样品含量测定

精密度吸取供试品溶液2.0mL,按“标准曲线绘制”项下方法分别测定吸光度。
结果计算:
多糖含量(%)=(C·D)/V×100
式中:
C-供试液葡萄糖浓度(mg/mL);
D-代试液的稀释因素;
V-供试液体积(mL)。